Determinazione di cortisolo, cortisone e relativi metaboliti di fase II in matrice urinaria mediante LC-MS/MS e potenziali applicazioni in ambito clinico

Cortisol is a glucocorticoid involved in many disease processes both as a “side effect” and as a means of diagnosing disease. To date, the diagnostic procedure for diseases of the adrenal gland is very long and sometimes the diagnostic suspicion cannot be identified immediately, because of all the nonspecific symptoms and similar hormonal changes; therefore, it is necessary to develop new methods that lead to a diagnosis in less time. The method proposed to approach this issue is a method of determination of cortisol, cortisone and related phase II metabolites in urinary matrix by LC-MS/MS and “dilute and shoot” technique for sample preparation. The method was validated, analytical performance was compared with that of one of the kits still in use in a clinical biochemistry laboratory, and applied to a set of real samples from patients with adrenal diseases to investigate the usefulness of phase II metabolites in disease diagnosis. The validation results, obtained through the MVA software, were satisfactory. By means of the Passing-Bablock test and the Blant-Altman test, applied to the comparison of the datasets, derived from the experimental method and the routine method, the maintenance of analytical performance between the two methods was confirmed. Finally, by doing the Kruskal-Wallis test and the Mann-Whitney test, it was understood which analytes showed significant differences among the five pathological classes considered, and among the comparisons of two classes at a time, which analytes showed significant differences; the most relevant finding was the confirmation of a possible usefulness of phase II metabolites in diagnosing adrenal diseases.

Il cortisolo è un glucocorticoide coinvolto in molti processi patologici sia come "effetto collaterale" sia come mezzo per la diagnostica della patologia. Ad oggi, l’iter diagnostico per le patologie del surrene è molto lungo ed a volte non si riesce ad individuare subito il sospetto diagnostico, a causa di tutti i sintomi aspecifici ed alle alterazioni ormonali simili; per questo motivo risulta necessario sviluppare nuovi metodi che portino ad una diagnosi in tempi minori. Il metodo proposto per approcciarsi a questa problematica è un metodo di determinazione di cortisolo, cortisone e relativi metaboliti di fase II in matrice urinaria mediante LC-MS/MS e tecnica di "diluite and shoot" per la preparazione del campione. Il metodo è stato validato, si è confrontata la prestazione analitica con quella di uno dei kit tutt'ora in uso presso un laboratorio di biochimica clinica e si è applicato ad un set di campioni reali di pazienti affetti da patologie del surrene per investigare l'utilità dei metaboliti di fase II nella diagnosi delle patologie. I risultati della validazione, ottenuti tramite il software MVA, sono risultati soddisfacenti. Tramite il test di Passing-Bablock e quello di Blant-Altman, applicati al confronto tra i set di dati, ricavati dal metodo sperimentale e quello di routine si è auta conferma del mantenimento delle prestazioni analitiche tra i due metodi. Infine, facendo il test di Kruskal-Wallis e quello di Mann-Whitney, si è capito quali analiti presentassero delle differenze significative tra le cinque classi patologiche considerate e tra i confronti tra due classi alla volta, quali analiti dimostrassero delle differenze significative; il dato più rilevante è stata la conferma di una possibile utilità dei metaboliti di fase II nella diagnostica delle patologie del surrene.