Verso lo sviluppo di immunoassay basati su nanoMIP: strategie di immobilizzazione per il coating delle micropiastre

I polimeri a stampo molecolare (MIP) sono materiali biomimetici sintetici altamente reticolati che hanno cavità capaci di riconoscimento molecolare selettivo verso la molecola su cui vengono stampati. Sono caratterizzati dalla presenza di gruppi funzionali stericamente orientati in modo da essere complementari ad una molecola utilizzata come stampo nel processo di polimerizzazione. Recentemente, la tecnologia dell'imprinting molecolare ha subito un'evoluzione attraverso la sintesi di nanoparticelle in fase solida (nanoMIP). Tale approccio permette di sopperire ad alcuni dei problemi intrinsechi della sintesi in bulk ed inoltre, hanno dimostrato di essere efficienti imitatori artificiali dei recettori naturali e una promettente alternativa agli anticorpi nelle applicazioni sensoriali e bioanalitiche. Ad oggi, l'applicazione di nanoMIP in saggi di legame biomimetico come ELISA è ostacolata da diversi problemi tecnici, tra cui un'immobilizzazione riproducibile ed efficiente su superfici solide. Con l'obiettivo di affrontare questo problema, abbiamo valutato l'applicazione di nanoMIP all'interno di una piastra di tipo di test immunoassay. Qui, i nanoMIP con proprietà di riconoscimento molecolare verso l'antibiotico ciprofloxacina, svolgono il ruolo di elementi di riconoscimento. Sono stati quindi sviluppati diversi protocolli di immobilizzazione sui pozzetti di piastre da microtitolazione. L'efficacia dell'immobilizzazione è stata osservata in combinazione con la capacità di legame della superficie funzionalizzata utilizzando la molecola templante (ciprofloxacina) funzionalizzata con la perossidasi di rafano (HRP) che ne permette la rivelazione colorimetrica attraverso l’uso di opportuno substrato cromogeno. In tal modo, il segnale HRP fornisce, contemporaneamente, una stima dell'innesto covalente di nanoMIP sul pozzetto della micropiastra e delle proprietà di riconoscimento selettivo verso la molecola stampo. Questo lavoro apre la strada allo sviluppo di saggi pseudo-immunochimici competitivi efficienti e riproducibili in cui l'elemento di riconoscimento è rappresentato da nanoMIP su misura.