Applicazione di un sistema automatizzato di cromatografia liquida accoppiata alla spettrometria di massa di tandem per lo studio della stabilità dei farmaci immunosoppressori

Gli immunosoppressori sono farmaci in grado di inibire la risposta immunitaria, ad esempio per evitare reazioni di rigetto dopo trapianti d’organo. La Ciclosporina A, il Tacrolimus, il Sirolimus e l’Everolimus sono gli immunosoppressori maggiormente utilizzati per prevenire il rigetto. Il monitoraggio terapeutico prevede la misurazione e l'interpretazione delle concentrazioni di questi farmaci nei fluidi biologici, con l’obiettivo di prevenire le risposte dell’organo, per questo è parte integrante dei protocolli di trapianto. Per prima cosa si è fatta una comparazione tra il nuovo metodo proposto dall’azienda Thermo Fisher Scientific con il metodo usato in routine proposto dall’azienda Chromsystem andando a determinare il Bias%, la riproducibilità, la ripetibilità e la stabilità dei QC per 20 giorni andando a determinare l’accuratezza del metodo. Una volta valutate le performace dello strumento si è passati allo studio della stabilità dei famaci immunosoppressori su sangue intero. Sono stati reclutati 13 pazienti per ciascun analita (Ciclosporina A, Tacrolimus, Everolimus e Sirolimus), per ciascuno di questi sono stati creati dei pool di sangue intero da cui sono state fatte 16 aliquote. La prima aliquota viene analizzata il primo giorno e sarà il campione di riferimento (BL). Tre aliquote verranno conservate a temperatura ambiente, la prima verrà analizzata il giorno successivo al BL, la seconda due giorni dopo e la terza quattro giorni dopo. Altre cinque aliquote vengono conservate a 4°C analizzate tre, cinque, otto, undici e 15 giorno dopo. Due aliquote vengono conservate a -20°C e analizzare 15 e 31 giorni dopo. Altre due aliquote vengono conservate a -80°C e analizzate 31 e 61 giorni dopo. Le ultime tre aliquote faranno dei cicli di congelamento/scongelamento a -80°C, la prima farà un ciclo di congelamento e scongelamento, la seconda due e la terza tre.