Effetti dell'istamina sull'espressione del canale del cloro ClC-5

Several evidence suggest that histamine, binding to the H4 receptor in the proximal tubule, influences the tubular reabsorptive machinery by regulating the expression of megalin and NHE3; however, the effect on other molecules responsible for tubular reabsorption remains unknown. In particular, the attention can be focused to the ClC-5 chloride channel: its deletion is associated with proteinuria and albuminuria. The aim of this Thesis is to evaluate the effects of histamine on ClC-5 expression in HK-2 cells and comparatively in kidneys from diabetic mouse obtained in previous studies. Histamine induced a time- and concentration-dependent reduction (maximum effect at 100 nM at 48 h) of ClC-5. The use of chlorphenirmine 10 µM (anti-H1) and JNJ7777,120 1 µM (anti-H4) was equally effective in preventing the effects of histamine, indicating the involvement of both receptors. Ex-vivo, we observed a significant reduction in ClC-5 expression, but the antagonism of H1 or H4 receptors did not preserve the basal expression level of the channel. In conclusion, the data of this Thesis provide the basis for investigating the role of ClC-5 in diabetic nephropathy, but the data are in favour a marginal role of histamine in the regulation of ClC-5.

Diverse evidenze suggeriscono che l’istamina, legandosi al recettore H4 nel tubulo prossimale ne influenzi i processi di riassorbimento regolando l’espressione di megalina e NHE3; tuttavia, l’effetto su altre molecole responsabili del riassorbimento tubulare rimangono sconosciuti. Tra tutti, di particolare interesse risulta il canale del cloro ClC-5, la cui assenza è associata a proteinuria e albuminuria. Scopo di questa Tesi è valutare gli effetti dell’istamina sull’espressione di ClC-5 in cellule HK-2 e comparativamente in campioni di rene di topi diabetici ottenuti da precedenti studi. L’istamina ha indotto una riduzione tempo e concentrazione-dipendente (effetto massimo a 100 nM a 48 h) di ClC-5. L’uso di clorfeniramina 10 µM (anti-H1) e JNJ7777,120 1 µM (anti-H4) è risultato parimenti efficace nel prevenire gli effetti dell’istamina, indicando il coinvolgimento di entrambi i recettori. Tuttavia, ex-vivo, sebbene si sia dimostrata una riduzione dell’espressione di ClC-5 nell’animale diabetico, l’antagonismo dei recettori H1 o H4 non ha preservato i livelli di espressione di tale canale. In conclusione, i dati di questa Tesi supporta getta le basi per indagare il suolo di ClC-5 nel contesto della nefropatia diabetica, ma i dati propendono per un ruolo marginale dell’istamina nella regolazione di ClC-5.