Alterazioni genetiche in linee cellulari umane modificano la risposta ad inibitori della chinasi Src.

Src, primo oncogene ad essere identificato, è una tirosin-chinasi citoplasmatica che riveste un ruolo fondamentale nel mantenimento dell'omeostasi cellulare. Src partecipa a molteplici funzioni fisiologiche cellulari, come la proliferazione, la sopravvivenza, la regolazione del citoscheletro, il controllo della forma, la motilità, la migrazione, l'adesione cellula-cellula e cellula-matrice (Thomas & Brugge, 1997; Yeatman, 2004). Src svolge un ruolo cruciale nella cancerogenesi, processo in cui tutte queste funzioni risultano alterate. Gli inibitori di Src rappresentano una valida strategia terapeutica antitumorale; in questa tesi ne sono stati presi in considerazione il bosutinib (SKI-606) e il saracatinib (AZD0530), attualmente sono in fase di sperimentazione clinica. Lo scopo del lavoro è stato quello di indagare se l'inserimento di mutazioni a carico di oncogeni, in concomitanza con il silenziamento di geni oncosoppressori, potesse modificare la proliferazione di una linea cellulare epiteliale umana non trasformata di mammella (hTERT-HME1) trattata con bosutinib o saracatinib. Gli oncogeni e gli oncosoppressori presi in esami sono stati rispettivamente EGFR, BRAF, PI3K, KRAS e Rb1 e PTEN. La proliferazione cellulare è stata valutata attraverso la misurazione della produzione di ATP mediante luminescenza, mentre il silenziamento dei geni oncosoppressori è stato confermato mediante western blotting. L'inserimento delle mutazioni a carico di KRAS o di PI3K, sia nell'esone 9 sia nell'esone 20, ha conferito resistenza alle cellule trattate con i due inibitori di Src, mentre la mutazione di EGFR non ha modificato la sensibilità ai farmaci. E' stata invece osservata una diversa risposta farmacologica nelle cellule mutate per BRAF: tale mutazione ha indotto infatti una spiccata resistenza nelle cellule trattate con saracatinib, con un aumento della proliferazione di oltre il 30% rispetto alle cellule wild-type, mentre non si sono osservate differenze significative in seguito a trattamento con bosutinib. Il differente effetto indotto dai due farmaci potrebbe essere spiegato dall'inibizione di un diverso pannello di chinasi coinvolte nella trasduzione del segnale (Puttini et al., 2006; Green et al., 2009). Più controverso è apparso invece il ruolo del silenziamento dei geni oncosoppressori. Questo modello sperimentale permette di indagare in vitro la correlazione tra alterazioni genetiche e risposta farmacologica e rappresenta un ottimo strumento per lo studio dei possibili meccanismi molecolari alla base della resistenza a farmaci antitumorali; potrebbe inoltre essere utile per disegnare trials clinici mirati alla selezione di pazienti realmente responsivi alla terapia.