SVILUPPO E VALIDAZIONE DI UNO SCREENING MULTIRESIDUO PER LA DETERMINAZIONE DI RESIDUI DI FARMACI E PROMOTORI DELLA CRESCITA IN URINA BOVINA, MEDIANTE HPLC-MS/MS

L'argomento di questa tesi è la messa a punto e la validazione di uno screening multiresiduale per la ricerca di residui di farmaci veterinari e promotori della crescita nell'urina bovina. Questo metodo permette di monitorare in un'unica analisi quattro classi diverse di analiti: glucocorticoidi, β-agonisti,anabolizzanti, e promazine. L'urina viene trattata con l'enzima β-glucuronidase/arilsulfatase, per deconiugare le molecole glucuronate, gli analiti vengono recuperati mediante estrazione liquido-liquido con dietiletere. La separazione cromatografica viene effettuata con una colonna Phenomenex Synergi Fusion-RP, con un'eluizione a gradiente basata su acetonitrile ed una soluzione acquosa di acido formico allo 0,1% p/v come fasi mobili. Tra il sistema cromatografico e l'analizzatore è inserita l'interfaccia ESI (Electronspray Ionization) in modalità positiva. Per la rivelazione si sfrutta la modalità SRM (Selected Reaction Monitoring), ovvero si vanno a monitorare le frammentazioni caratteristiche degli analiti, osservandole in un sistema doppio di analizzatori di massa (MS/MS). Il metodo è stato validato seguendo le indicazioni contenute nella Decisione 2002/657/CE. Sono stati quindi verificati i seguenti parametri: specificità, capacità di rilevazione (CCβ), robustezza, stabilità degli estratti. Le prove eseguite hanno permesso di portare a termine in maniera soddisfacente la validazione. Lo screening multiresiduale, presentato in questa tesi, viene utilizzato dall'Istituto Zooprofilattico del Piemonte Liguria e Valle D'Aosta per l'analisi dei campioni di urina bovina ¿Extra¿Piano¿, ovvero i campioni previsti dai Servizi Veterinari della Regione Piemonte oltre al Piano Nazionale Residui, quando sia necessario intensificare i controlli in seguito a indicazioni di trattamenti illeciti sul territorio regionale.