CARATTERIZZAZIONE DI SPECIE E IBRIDI DEL GENERE MENTHA ATTRAVERSO FINGERPRINTING MOLECOLARE

Il genere Mentha racchiude al suo interno piante di particolare importanza economica in quanto produttrici di olio essenziale. Considerato il vasto utilizzo di queste piante e dei loro derivati nel settore produttivo, è importante mettere a punto metodiche di caratterizzazione del materiale vegetale che evidenzino specie ed ibridi presentanti peculiari profili metabolici. Scopo di questa tesi è stato l'applicazione di metodiche innovative, basate su un'indagine biomolecolare-genomica, per caratterizzare e facilitare la distinzione di specie e ibridi del genere Mentha. Ulteriore obiettivo è stato la messa a punto di protocolli rapidi, altamente sensibili e facilmente applicabili ai diversi casi di studio anche in settori differenti da quello della ricerca. Il lavoro è consistito nell'amplificazione con primers specifici delle regioni NTS (Not Trascribed Spacer) del gene 5S-rRNA, sequenze caratterizzate da un'elevata variabilità e quindi utili alla discriminazione di taxa appartenenti allo stesso genere. Questo ha portato all'ottenimento di amplificati di diversa taglia sufficienti ad una prima distinzione in gruppi dei vari campioni: alcuni hanno generato bande di grandezza compresa tra le 450-500 bp (es. M. spicata, ecc) e altri tra 350-400 bp (M. acquatica, ecc). In particolare, nei campioni di Mentha x piperita è stata riscontrata la presenza di un duplice amplificato, possibile evidenza dell'evento di ibridazione che ne ha dato origine. Non essendo ciò sufficiente alla totale discriminazione dei singoli campioni, si è provveduto al clonaggio e al successivo sequenziamento di tutte le bande amplificate. Le sequenze così ottenute sono state messe in relazione tramite l'elaborazione di alberi filogenetici che hanno evidenziato i rapporti di parentela presenti tra gli ibridi e le specie, confermando i dati di letteratura. Infine l'analisi in silico ha permesso di individuare specifici siti di restrizione favorendo una rapida ed univoca discriminazione dei diversi campioni. Questo è stato reso possibile grazie al confronto dei diversi profili di restrizione ottenuti con la digestione enzimatica degli amplificati della regione 5S-NTS. Concludendo, la tecnica scelta per caratterizzare specie e ibridi del genere Mentha, utilizzando il fingerprinting molecolare, ha dimostrato la sua efficacia, permettendo una rapida ed inequivocabile discriminazione di tutti i campioni analizzati, aprendo inoltre la strada a possibili sue applicazioni nel settore produttivo.