Uno studio in vitro per valutare preliminarmente l'effetto dello stress su insorgenza e progressione della Sclerosi Laterale Amiotrofica

Il nostro organismo è costantemente sottoposto a diversi tipi di stress (fisici e/o sociali), in grado di determinare l’accumulo di alterazioni cellulari che predispongono a diverse patologie, incluse alcune malattie neurodegenerative. La Sclerosi Laterale Amiotrofica (SLA) è una malattia neuromuscolare, caratterizzata dalla progressiva degenerazione dei motoneuroni superiori ed inferiori. Tra i meccanismi fisiopatologici coinvolti nella SLA vi sono citotossicità, stress ossidativo e neuro-infiammazione, processi tipicamente innescati anche da stress cronici. Il lavoro si propone dunque di indagare l’effetto dello stress su insorgenza e progressione della SLA. A tale scopo, è stato messo a punto un modello in vitro di SLA, utilizzando motoneuroni (linea cellulare NSC-34) esprimenti il gene mutato hSOD1(G93A) sotto il controllo di un promotore inducibile da doxiciclina. Sono innanzitutto state individuate le migliori condizioni per indurre il differenziamento delle cellule: 20 µM di acido retinoico per 4 giorni hanno permesso di osservare la presenza di numerosi neuriti, come confermato dalle analisi di immunofluorescenza (MAP2 e ChAT). Successivamente, l’espressione della proteina hSOD1(G93A), indotta dalla somministrazione di 5 µg/ml di doxiciclina, è stata verificata tramite analisi western blot. Per riprodurre una condizione di stress (deprivazione di ossigeno, in presenza di alta o bassa concentrazione di glucosio), il cloruro di cobalto (100 µM) è stato utilizzato come agente ipossico e la sua tossicità è stata misurata mediante test MTT. Il danno cellulare è stato poi studiato valutando l’attività mitocondriale (mediante MitoTracker Red e Green e saggio di capacità antiossidante totale) e il marker UCP4, ed analizzando alterazioni nell’espressione genica mediante real-time PCR. Sebbene i risultati riportati siano ancora preliminari, essi aiuteranno a chiarire la correlazione tra i fattori di stress e l’insorgenza e/o la progressione della SLA.