Validazione di un reattivo di laboratorio. Trial di validazione del GAF (Glyoxal-Acid-Free)

Phosphate-buffered Formalin (PBF), despite its recognized toxicity, represents the fixative of reference in histology and its substitution would require a reagent with similar reliability in terms of morphological excellency and antigenic as well as molecular (DNA and RNA) preservation. A potential substitute should, in our opinion, be represented by a small aldehyde, sharing the reactivity, the penetration rate and the fixation properties of Formaldehyde. Glyoxal, a non-volatile, non-toxic di-aldehyde is endowed with these characteristics (see: "Acid-free glyoxal as a substitute of formalin for structural and molecular preservation in tissue samples" G.Bussolati & Al.), provided that deleterious acids present in the commercial preparations are removed. In order to validate this fixative, we set an innovative Trial ("ADDAX-GAF-2019") matching PBF vs Glyoxal-Acid-Free (GAF®) fixative (produced by Addax Biosciences srl. Turin, Italy), which to our knowledge represents the first international and independently evaluated validation study for a histological reagent. The study, conducted in three Centers: Candiolo, (Italy), Barcelona (Spain) and Manchester (U.K.) had the following features: 1) Collection from pathological samples of 5 organs (breast, colon, lung, endometrium and prostate) of 130 biopsies to be fixed, in parallel, in PBF and GAF®. 2) Sections stained with H&E and 4 immunohistochemical markers (e.g. for breast: ER, PgR, HER2 and Ki67) were scanned and presented blindly and in parallel to reviewers. An original presentation program was devised by CRS4 (Pula, Italy) using the Omero platform. 3) Reviewers had to answer blindly to questions on the morphological (tissue and cellular) preservation and diagnostic fitness, based on comparable structure and immunohistochemical features. The non-inferiority certified study is being conducted and controlled by an international CRO (Contract Research Organization: 1MED, Switzerland), statistically evaluating the data and assessing the results. Because of the well-known problems related to today's difficulties in sample management, we haven't already been able to reach the goal set for the Interim Report (65 cases), therefore to obtain statistically analyzed results. Some images of samples, alternatively and in parallel fixed in PBF and in GAF, are visible in this project. The collection of all the images referring to the cases involved in the process will be available at the end of the study on the website www.addaxbio.com

La Formalina tamponata con fosfato (PBF), nonostante la sua riconosciuta tossicità, rappresenta il fissativo di riferimento in istologia e la sua, complicata, sostituzione richiederebbe un reagente di analoga affidabilità in termini di mantenimento della morfologia cellulare e conservazione antigenica, oltre che molecolare (DNA e RNA). Un potenziale sostituto dovrebbe, a nostro avviso, essere rappresentato da una piccola aldeide, che condivida la reattività, la velocità di penetrazione e le proprietà di fissazione della Formaldeide. Il gliossale, una di-aldeide non volatile e non tossica, è dotato di queste caratteristiche (vedi: "Acid-free glyoxal as a substitute of formalin for structural and molecular preservation in tissue samples" G.Bussolati & Al.), a condizione che vengano rimossi gli acidi presenti nelle soluzioni disponibili in commercio. Per convalidare questo fissativo, è stato impostato un Clinical Trial ("ADDAX-GAF-2019") che confronta due fissativi istologici, rispettivamente PBF e Glyoxal Acid-Free (GAF®) (prodotto da Addax Biosciences srl., Torino, Italia). A nostra conoscenza questo rappresenta il primo studio sperimentale di validazione internazionale, valutato in modo indipendente, per un reagente istologico nell'ottica della sostituzione della formalina. Lo studio, condotto in tre Centri: Candiolo, (Italia), Barcellona (Spagna) e Manchester (Regno Unito) ha le seguenti caratteristiche: 1) Prelievo da campioni patologici di 5 organi (mammella, colon, polmone, endometrio e prostata) di 130 biopsie da fissare, in parallelo, in PBF e GAF®. 2) Le sezioni colorate con H&E e 4 marcatori immunoistochimici (ad esempio per il seno: ER, PgR, HER2 e Ki67) sono state scansionate e presentate in cieco e in parallelo ai revisori. Un originale programma di presentazione è stato ideato da CRS4 (Pula, Italia) utilizzando la piattaforma Omero. 3) I revisori dovevano rispondere ciecamente alle domande sulla conservazione morfologica (tissutale e cellulare) e l'idoneità diagnostica, sulla base di strutture comparabili e caratteristiche immunoistochimiche. Lo studio certificato di non inferiorità è condotto e controllato da un CRO internazionale (Organizzazione di ricerca a contratto: 1MED, Svizzera), che valuta statisticamente i dati e valuta i risultati. I noti problemi legati alle odierne difficoltà nella gestione dei campioni, non hanno permesso, ancora, di raggiungere l'obiettivo fissato per il Rapporto Intermedio (65 casi) e quindi di ottenere già dei risultati analizzati statisticamente, ma alcune delle immagini dei campioni fissati alternativamente e in parallelo in PBF e in GAF sono presentate in questo progetto. La raccolta di tutte le immagini riferite ai casi coinvolti nel Trial saranno disponibili al termine dello studio sul sito www.addaxbio.com