EFFETTI BIOLOGICI DEL TRATTAMENTO IPOSSICO IN VITRO MEDIANTE COBALTO CLORURO SU UNA LINEA DI MELANOMA ORALE CANINO

Introduzione: L’ipossia è una condizione che si riscontra frequentemente nei tumori solidi a causa della crescita delle cellule e del loro attivo metabolismo. Numerosi sono gli studi condotti in merito, poiché è stato dimostrato che l’ipossia induce un’intensa regolazione trascrizionale, la quale, oltre a promuovere la sopravvivenza della cellula tumorale in condizioni O2-carenziali, apporta caratteri di malignità. HIF-1 è il fattore più importante che regola questo processo. Esso è un fattore di trascrizione che regola l’espressione genica in condizioni ipossiche. In tale condizione i sistemi di degradazione di HIF-1α sono meno efficienti, così HIF-1α, si accumula, trasloca nel nucleo e induce la trascrizione dei geni target. Fra i più importanti geni regolati in ipossia si annovera VEGFA, che promuove la vascolarizzazione tumorale, GLUT-1, che incrementa la capacità della cellula di assumere glucosio dall’esterno, e CXCR4, che promuove l’invasione metastatica degli organi secondari. Il melanoma orale canino (MOC) è un tumore maligno solido molto aggressivo e nonostante le terapie, la prognosi risulta ad oggi infausta. Obiettivi: Dato il ruolo primario dell’ipossia nella patogenesi tumorale, lo scopo di questo lavoro è dimostrare se l’applicazione in vitro dell’agente ipossico CoCl₂ su una linea cellulare di melanoma orale canino (‘’OLGA’’, isolata da una metastasi linfonodale presso il nostro laboratorio) è in grado di fare accumulare HIF-1α nella cellula con conseguente trascrizione dei geni VEGFA, GLUT-1 e CXCR4. CoCl₂ è un composto in grado di mimare l’ipossia inducendo l’accumulo di HIF-1α. Materiali e metodi: Per l'esecuzione dell'esperimento, è stato applicato CoCl₂ su OLGA alle concentrazioni di 50, 100 e 200 µM, ciascuna per 12, 24 e 48 ore. Successivamente è stata valutata l’espressione genica di GLUT1, VEGFA e CXCR4 mediante qRT-PCR mentre l’espressione proteica di HIF-1α sotto effetto ipossico è stata valutata tramite analisi Western Blot. Risultati e Considerazioni: Come atteso, l’analisi statistica dei risultati ha rivelato che l’ipossia in vitro realizzata con CoCl₂ promuoveva la traduzione di HIF-1α nonché la trascrizione di GLUT-1 e VEGFA, confermandone la promozione trascrizionale mentre per quanto riguarda CXCR4 non è stato riscontrato un aumento della trascrizione. I risultati preliminari di questo lavoro confermano come anche nel MOC l’ipossia è in grado in vitro di indurre accumulo di HIF-1α e la trascrizione di geni specifici come già dimostrato nell’OSA canino. Ulteriori studi sono comunque necessari per confermare il ruolo dell’ipossia nel MOC.