Sviluppo di un sistema diagnostico rapido per la determinazione di Bacillus Subtilis

In questo progetto di tesi, è stato sviluppato un dosaggio immunologico qualitativo a flusso laterale per determinare la presenza di Bacillus Subtilis. È un progetto in collaborazione con il dipartimento di Beni Culturali dell’ Università di Bologna. Si ritiene che i batteri B.Subtilis, siano responsabili del degrado di affreschi. Il test analitico sviluppato si basa sul metodo Lateral Flow Immunoassay (LFIA) colorimetrico, in cui, viene usato uno stesso anticorpo come bioreagente di cattura ancorato ad una membrana porosa e come bioregante selettivo marcato con nanoparticelle di oro per la rivelazione. I parametri sono stati studiati utilizzando una preparazione commerciale di B.Clausii (enterogermina) con l’obiettivo di studiare: Anticorpo B.Subtilis ( marcato a 7 µg con nanoparticelle d’ oro ad OD2). L’anticorpo di cattura immobilizzato sulla membrana di nitrocellulosa è dispensato sulla linea di T alla concentrazione di 1mg/mL, sulla linea di controllo è dispensata proteina G alla concentrazione di 0,5 mg/mL. Il tampone di corsa è tampone fosfato 20 mM pH 7,4. Dopo avere identificato le condizioni operative che garantiscono la massima sensibilità, si è stimato il valore di limite di rilevabilità visiva e la selettività nei confronti di altri batteri ubiquitari quali: Lactobacillus Casei (enterolactis),Sporelacto Bacillus (lacto più),S. Boulardis (enterogermina viaggi),Lactobacillus Plantarum e Pediococcus Acidilactici (triflorvis).