STRATIFICAZIONE DEI CARCINOMI DELLA MAMMELLA ¿DOPPI EQUIVOCI¿ PER LO STATO DEL RECETTORE HER2

L'analisi immunoistochimica (IHC) e l'ibridazione in situ (ISH) rappresentano le metodiche di base per la valutazione dello stato del recettore HER2 nella diagnosi del carcinoma mammario. È stato dimostrato che il 13% dei carcinomi della mammella con un'espressione equivoca del recettore HER2 (score 2+ in IHC) presentano altresì uno stato equivoco per quanto riguarda il gene codificante il suddetto recettore (HER2/CEP17<2 e una media delle copie del gene HER2 compresa tra 4 e 6 in ISH) che quindi porta a definire questi carcinomi come ¿doppi equivoci¿. Lo scopo della tesi è stato quello di valutare se i carcinomi mammari con risultato ¿doppio equivoco¿ per l'espressione di HER2 possano essere ulteriormente categorizzati in ¿subset¿ con significato biologico o clinico. E' stata condotta un'analisi di espressione genica, mediante piattaforma cDNA microarray, in una coorte di 27 carcinomi mammari doppi equivoci e in due gruppi controllo con medesimo stato del recettore estrogenico e comparabile grado istologico (22 HER2- e 22 HER2+). L'RNA è stato estratto dopo microdissezione così da arricchire il contenuto di cellule tumorali (>80%) e sottoposto a metodica DASL (cDNA-mediated Annealing, Selection, extension and Ligation). E' stata quindi effettuata un'analisi di clustering considerando i geni differenzialmente espressi tra i carcinomi HER2+ e HER2-. La classificazione sulla base dei 24 geni identificati ha permesso di suddividere i casi doppi equivoci in un gruppo assimilabile a casi HER2+ e in un altro assimilabile ai casi HER2-. Più nel dettaglio, sono emersi 3 clusters che dimostrano una differente distribuzione dei casi con un diverso stato di HER2 (p<0,0001). Il cluster C include tutti i casi HER2+ e 5 casi doppi equivoci ed è associato ad elevata espressione dei geni appartenenti all'amplicone di HER2. Il cluster B è composto, invece, da 9 HER2- e 12 casi doppi equivoci e manifesta bassa espressione dei geni correlati ad HER2 ed elevata espressione di questi geni: TPRG1, NOVA1, AGTR1, SEZ6L, MAPT, GSTM1, SORCS1, DSCR6, NPY1R. Infine, il cluster A comprende 13 casi negativi per HER2 e 10 casi doppi equivoci, tutti caratterizzati da bassa espressione dei geni correlati ad HER2 ma un'espressione non omogenea per quanto riguarda gli altri geni utilizzati nella classificazione. L'espressione dei 3 geni identificati come più rappresentativi (TPRG1, NOVA1, AGTR1) è stata analizzata attraverso The Cancer Genome Atlas (TCGA) riscontrando per questi geni un'espressione mutualmente esclusiva con quella del recettore HER2. Un sottogruppo di 12 casi doppi equivoci è stato analizzato con test molecolare basato su una ¿signature¿ di espressione genica (Prosigna®) che: i) assegna ciascun campione ad una delle 4 sottoclassi molecolari (Luminal A, Luminal B, HER2-enriched, Basal-like); ii) elabora una percentuale di rischio per la paziente di incorrere in una recidiva a distanza di 10 anni. La maggior parte dei carcinomi in esame vengono classificati come Luminali B (75%) e mostrano un valore di rischio di ricorrenza elevato (92% con alto rischio). Il nostro studio suggerisce che i carcinomi con stato doppio equivoco di HER2: i) possono essere ulteriormente stratificati in diverse categorie con potenziale significato biologico; ii) sono più frequentemente caratterizzati da un elevato rischio di recidiva. L'analisi trascrittomica potrebbe essere pertanto di supporto nel formulare una migliore scelta terapeutica per questa discussa categoria di pazien