La diagnostica rapida delle emocolture: identificazione diretta da flacone positivo con spettrometria di massa MALDI-TOF

Sepsis is a severe systemic inflammatory reaction, characterized by a high mortality and morbidity rate, leading to a dysregulated host immune response resulting in organ dysfunction. For an effective treatment of these pathological findings, it is essential to identify the responsible microorganism as early as possible, in order to start a targeted therapy and favor the patient’s prognosis. Given this need, in recent years research has increasingly focused on the application of analysis protocols that make it possible to reduce the time required to provide the clinician with an initial identification. In particular, the possibility of carrying out the identification directly from the blood culture bottle when this is positive for microbial growth would significantly reduce the Turn Around Time (TAT), which today strongly depends on the incubation times required of the plates for the growth of the isolated colonies. Using the MALDI-TOF mass spectrometry technology, starting from an aliquot of blood broth taken from the positive bottle and obtaining a pellet containing the bacterial material through a series of washing and centrifugation steps, the possibility of performing a correct identification of genus and species in a short time was studied. This would allow the microbiology laboratory to quickly provide useful information to the attending physician for starting the pharmacological treatment, which will then be confirmed or possibly modified by the subsequent identification obtained through a routine blood culture analysis procedure.

La sepsi è una grave reazione infiammatoria sistemica, caratterizzata da un alto tasso di mortalità e di morbilità, che porta ad un’alterata risposta immunitaria da parte dell’ospite con conseguente disfunzione d’organo. Per un efficace trattamento di tale quadro patologico è fondamentale identificare il più precocemente possibile il microrganismo responsabile, in modo tale da poter avviare una terapia mirata e favorire la prognosi del paziente. Data tale necessità, negli ultimi anni la ricerca si è focalizzata sempre di più sull’applicazione di protocolli di analisi che permettano di ridurre il tempo necessario per fornire al clinico una prima identificazione. In particolare la possibilità di eseguire l’identificazione direttamente dal flacone di emocoltura quando questo risulta positivo per crescita microbica, darebbe l’opportunità di ridurre significativamente il Turn Around Time (TAT), ad oggi fortemente dipendente dai tempi necessari di incubazione delle piastre per la crescita delle colonie isolate. Utilizzando la tecnologia della spettrometria di massa MALDI-TOF, partendo da una aliquota di sangue-brodo prelevata dal flacone positivizzato e ottenendo un pellet contenente il materiale batterico tramite una serie di passaggi di lavaggio e di centrifugazione, si è studiata la possibilità di ottenere una corretta identificazione di genere e di specie in breve tempo. Ciò permetterebbe al laboratorio di microbiologia di fornire in tempi rapidi un’informazione utile al medico curante per l’avvio del trattamento farmacologico, che sarà poi confermato o eventualmente modificato dalla successiva identificazione ottenuta mediante procedura di ruotine di analisi delle emocolture.