Il dosaggio di cortisolo e cortisone in chimica clinica: sviluppo e validazione di un metodo basato su UHPLC/MS-MS

Among the analytical-separative techniques that allow a complex mixture to be resolved into its components and determine them both qualitatively and quantitatively, the UHPLC-MS/MS (Ultra High Pressure/Performance Liquid Chromatography) technique coupled with tandem mass spectrometry (MS) (conducted through the isolation and fragmentation of ions and the subsequent identification and quantitation of the specific fragments obtained) stands out positively in terms of specificity, sensitivity and reliability of the final result; for this reason, its potential was exploited, before others, in clinical areas such as neonatal screening or the monitoring of immunosuppressive drugs. Currently, endocrinology is adapting the methods used in the determination of numerous analytes for diagnostic and therapeutic purposes. As required by national and international guidelines, UHPLC/MS-MS is progressively replacing immunoassays for the measurement of steroids in clinical laboratories; therefore, the present study is focused on the development of a method for the measurement of urinary cortisol and cortisone and serum cortisol with this technique. The conclusions reached are completed with the comparison between the results obtained with the traditional immunometric method and those obtained in UHPLC-MS/MS.

Tra le tecniche analitico-separative che permettono di risolvere una miscela complessa nei suoi componenti e determinarli sia qualitativamente sia quantitativamente, la tecnica UHPLC-MS/MS, o cromatografia liquida ad ultra-alte pressioni/prestazioni (UHPLC, Ultra High Pressure/Performance Liquid Chromatography) accoppiata alla spettrometria di massa (MS, Mass Spectrometry) tandem, condotta, cioè, attraverso l’isolamento e la frammentazione di ioni e la successiva identificazione e quantizzazione dei frammenti specifici ottenuti, esprime diversi vantaggi in termini di specificità, sensibilità e attendibilità del risultato finale; per questa ragione, le sue potenzialità sono state sfruttate, prima che in altri, in ambiti clinici come lo screening neonatale o il monitoraggio dei farmaci immmunosoppressori. Attualmente, l’endocrinologia sta adeguando i metodi utilizzati nella determinazione di numerosi analiti a fini diagnostici e terapeutici. Come richiesto dalle Linee Guida nazionali ed internazionali, la UHPLC/MS-MS sta progressivamente sostituendo gli immunodosaggi per la misurazione di steroidi nei laboratori clinici, pertanto, il presente studio è focalizzato sullo sviluppo di una metodica per il dosaggio di cortisolo e cortisone urinari e cortisolo sierico con questa tecnica. Le conclusioni raggiunte sono completate con la comparazione tra i risultati ottenuti con metodo tradizionale immunometrico e quelli ottenuti con la tecnica UHPLC-MS/MS.