Applicazione della metodica BIOLOG per la valutazione dell'attività antimicrobica di composti argillo-organici

Oggetto della presente Tesi di Laurea è stata la valutazione dell'attività antagonista svolta da complessi argillo-organici a carico di una popolazione batterica mista. Tali complessi possono essere impiegati per la produzione di film plastici e la loro eventuale azione antimicrobica può rivestire interesse nel campo del packaging per l'industria alimentare. Un consorzio microbico precedentemente selezionato è stato posto a contatto per tempi crescenti con tre diverse organo-argille (HPS, 67G, 43B), e l'effetto del contatto sull'attività metabolica è stato valutato con un'applicazione della metodica Biolog, in piastre Eco Micro Plates, costituite da 96 pozzetti che contengono tre replicazioni di una serie di 31 fonti di Carbonio diverse, più un testimone, in presenza di un indicatore Redox (violetto di Tetrazolio). Le piastre inoculate sono state incubate a 25°C al buio e le variazioni di colore del Tetrazolio indotte dall'attività microbica, sono state misurate spettrofotograficamente. L'insieme dei valori così ottenuti ha costituito il cosiddetto profilo metabolico, che è stato espresso dall'indice AWCD (Average Well Colour Development). Misure successive di tale indice hanno permesso di ottenere, per ogni trattamento, una curva (curva AWCD) rappresentativa dell'attività metabolica corrispondente al trattamento stesso. Le curve sono state modellate con l'equazione di Gompertz (modificata) e i valori delle costanti caratteristiche dell'equazione sono stati usati per confrontare le curve tra loro e valutare gli effetti dei trattamenti. Nessun rilevante effetto antimicrobico è stato riscontrato per i composti HPS e 67G, quale che fosse il tempo di contatto preso in considerazione. Il composto 43B, invece, ha indotto una sensibile diminuzione dell'attività metabolica del consorzio, per tutti i tempi di contatto, determinando un minor valore dell'asintoto della curva e una maggior durata della fase lag, rispetto al testimone non trattato.

The present work deals with the evaluation of the antagonistic activity of organic-clay complexes against a mixed bacterial population. Such complexes may be employed for the manufacture of plastic films and their possible antimicrobial activity is of interest for packaging production in food industry. A previously selected bacterial consortium was put in contact for increasing time with three different organic-clays (HPS, 67G, 43B). The effect exerted by the different treatments on the metabolic activity of the microbial consortium was evaluated with an application of Biolog methodology, in Eco-Micro-plates, whose micro-wells contain three replicates of a set of 31 carbon sources and a blank, in presence of a Redox indicator (Tetrazolium violet). Inoculated plates were incubated at 25°C in the dark and the indicator colour changes induced in each plate by microbial activity were recorded as absorbance values at 590 nm wave-length, allowing the construction of the metabolic profiles corresponding to the treatments. Each metabolic profile was then expressed as AWCD (Average Well Colour Development) and successive AWCD values were calculated, at suitable incubation intervals, to assess the AWCD temporal evolution, which was plotted as AWCD curve. AWCD curves were fitted to Gompertz's (modified) mathematical equation and its constants used for comparison purposes to judge about treatments effects. No relevant effect was induced on the metabolic activity of the consortium by treatment with compounds HPS and 67G, for the tested times of contact. A decrease of metabolic activity was detected for compound 43B, for all the times of contact, in particular after a 7 days contact. Such decrease resulted in a lower value of the asymptote of the AWCD curve (A) and a longer duration of the lag phase (λ).