Interferenza da matrice in un test immunometrico per la determinazione di anticorpi diretti verso HV1 in siero bovino.

The test Eradikit® BoHV1-gE, developed for the diagnosis of infection by Herpes Virus type 1 in bovine and commercially available, shows, on negative samples as well as on the positive ones, the presence of a high nonspecific signal which limits the applicability and increases the incidence of false positives. The test is based on the detection of specific antibodies in blood serum using an immunometric assay. The work aimed at study the parameters involved in the method in order to identify the source of, eliminate, or at least reduce, the nonspecific signal thus increasing the diagnostic sensitivity of the determination. Parameters more affecting experimental results have been identified as: the buffer used in the separation between the free fraction and fraction bound to form immune complexes, the efficient mixing of the sample with its dilution buffer, the reduction of the quantity and of the reaction time of the conjugate used for detection. The new experimental conditions have been tested on 127 samples (of which 94 negative, 27 positive and 6 false positives). The results obtained have reported a diagnostic sensitivity of 100% and a diagnostic specificity of 99%.

Il test Eradikit® BoHV1-gE, sviluppato per la diagnosi di infezione da Herpes Virus di tipo 1 nei bovini e disponibile commercialmente, evidenzia, sui campioni negativi così come su quelli positivi, la presenza di un elevato segnale aspecifico che ne limita l'applicabilità e aumenta l'incidenza di false positività. Il test in esame si basa sulla ricerca degli anticorpi specifici nel siero di sangue mediante metodo immunometrico. Il lavoro svolto prende in esame i parametri coinvolti in questo tipo di metodo al fine di identificare l'origine, eliminare o almeno ridurre il segnale non specifico e incrementare la sensibilità diagnostica della determinazione. Dallo studio effettuato sono risultati determinanti per lo scopo: il tampone utilizzato nelle fasi di separazione tra frazione libera e frazione legata a formare gli immunocomplessi, la miscelazione efficiente del campione con il proprio tampone di diluizione, la riduzione del quantitativo e del tempo di reazione del coniugato enzimatico utilizzato per la rivelazione. Le nuove condizioni sperimentali sono state testate su 127 campioni (di cui 94 negativi, 27 positivi e 6 falsi positivi). I risultati ottenuti hanno riportato una sensibilità diagnostica pari al 100% ed una specificità diagnostica del 99%.