Strategie di catalisi mimica della perossidasi in saggi immunochimici

Questo studio esplora alternative all'utilizzo degli enzimi nei test ELISA a causa dei relativi svantaggi quali costi elevati, complessità del protocollo e limitata stabilità. La ricerca è suddivisa in tre fasi principali: (1) impiego di bioconiugati anticorpo-EDTA in piastre da microtitolazione per i test ELISA al fine di sfruttare l'attività simil-perossidasica tramite la reazione di Fenton, (2) utilizzo di bioconiugati anticorpo-nanoparticelle d'oro in piastre da microtitolazione per i test ELISA per sfruttare l'attività simil-perossidasica delle GNP nell'ossidare un substrato cromogeno, e (3) aumentare la sensibilità di un test LFIA utilizzando l'attività simil-perossidasica intrinseca delle GNP e un substrato cromogeno. I vantaggi dell'uso delle GNP includono un costo inferiore, un utilizzo minimo di anticorpi e la stabilità senza l'aggiunta di additivi. I bio-coniugati Ab-EDTA si sono dimostrati capaci di legare il Fe(III), specialmente impiegando un tampone fosfato salino acidificato. Inoltre, è stata dimostrata la capacità di legame specifico sulla fase solida funzionalizzata con la controparte dell’Ab. Tuttavia, i coniugati hanno mostrato limiti significativi nella capacità di legare un competitore analogo in soluzione, probabilmente a causa di una perdita delle proprietà di legame durante la sintesi. Similmente, i coniugati Ab-GNP, ottenuti per adsorbimento passivo hanno mostrato risultati analoghi per quanto riguarda il legame sulla piastra funzionalizzata. L'esito della competizione per il legame del GAR-GNP è analogo ai bio-coniugati Ab-EDTA, per contro il test competitivo con il sistema Ab-TFV-GNP sembra funzionare correttamente, anche se con valori di assorbanza molto bassi. L'utilizzo della reattività simil-perossidasica delle GNP nel formato LFIA ha mostrato risultati promettenti nell'incremento del segnale visivo post corsa colorimetrica, con un enhancement che varia tra il 50% e il 160%. Tuttavia, non è chiaro se ciò aumenti la sensibilità del dispositivo competitivo, ma potrebbe essere utile esplorare questa strategia su sistemi non competitivi per migliorare la sensibilità.